RPMI 1640 基础培养基配制操作指南：老实验员的经验之谈
摘要：本指南由一位拥有三十年生物实验室经验的老实验员编写，旨在为刚入行的年轻实验员提供一份详尽的 RPMI 1640 基础培养基配制操作指南。内容涵盖水尺的选择与校准、图纸识图、配制步骤、常见问题与解决方案、安全提示以及记录与存档等方面，力求事无巨细，帮助年轻实验员独立完成培养基的配制。
RPMI 1640 基础培养基配制操作指南
嘿，年轻人，我是老李，在实验室摸爬滚打了三十年，各种培养基配了不下几百种。今天就来跟你好好说说这 RPMI 1640 基础培养基的配制，别以为简单，里面的门道可多着呢！
1. 水尺的选择与校准
1.1 水尺的选择
可别小看这水尺，它直接关系到培养基配制的准确性。培养基配制可不是粗放的实验，必须保证精度！
- 量筒： 优先选择量筒，尤其是配制大体积溶液时。量筒的刻度相对均匀，读数误差较小。根据所需量取的体积，选择合适规格的量筒，一般来说，量取的体积最好在量筒最大刻度的 20%-80% 之间，这样精度较高。
- 烧杯： 烧杯的刻度只是粗略指示，不适合精确量取体积。除非后续需要转移到其他容器，否则不建议使用烧杯直接量取配制培养基所需的水。
- 移液器： 对于小体积的液体（例如几毫升），可以使用移液器精确量取。
这次咱们配制 RPMI 1640，假设需要配制 1L 的培养基，那就选择 1000mL 的量筒。记住，玻璃量筒比塑料量筒更耐腐蚀，更易于清洗。
1.2 水尺的校准
新买来的量筒或者长期使用的量筒，都可能存在刻度不准的情况。所以，在使用前一定要进行校准。
- 目测法： 将量筒放在水平桌面上，观察液面与刻度线是否平行。读数时，视线应与液面最低处保持水平。对于透明液体，读取弯月面下缘的刻度；对于不透明液体，读取弯月面上缘的刻度。
- 称重法： 如果实验室有高精度电子天平，可以使用称重法来校准量筒。先用量筒量取一定体积的纯水（例如 100mL），然后将水倒入已去皮的烧杯中，称重。水的密度在常温下接近 1g/mL，因此，水的重量（g）应该与体积（mL）基本相等。如果偏差较大，则说明量筒刻度不准，需要进行修正或者更换。
1.3 水的纯度
水的纯度对培养基的质量影响很大！自来水、蒸馏水可不行！必须使用高纯度的水，例如 Milli-Q 超纯水。这种水经过多重过滤和离子交换处理，几乎不含任何杂质，可以最大限度地减少对细胞生长的干扰。
不同实验室的水质确实可能不同，如果水质不达标，会导致培养基的 pH 值不稳定、出现沉淀、影响细胞生长等问题。所以，一定要确保水源的纯度。
2. 图纸识图
别以为实验室里只有实验操作，看图纸也是基本功！实验室的水路图，尤其是纯水机管路图，一定要能看懂。
- 水龙头标识： 图纸上会标明不同水龙头的水质，例如自来水、蒸馏水、纯水等。不要接错水龙头，否则会污染培养基。
- 管路材质： 不同的管路材质可能耐受不同的化学物质。如果接错管路，可能会导致管路腐蚀、泄漏等问题。
- 压力表位置： 压力表可以监测水路的压力，如果压力异常，需要及时排查原因。
如果年轻实验员不小心接错了水，比如把自来水接到纯水机上，轻则污染纯水机滤芯，重则损坏纯水机！这可不是闹着玩的！
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3. 配制步骤
3.1 准备工作
- 材料： RPMI 1640 粉末培养基、Milli-Q 超纯水、量筒、烧杯、搅拌器、pH 计、无菌过滤器 (0.22 μm)。
- 试剂： L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES 缓冲液（可选）、酚红指示剂（可选）。
- 仪器： 电子天平、磁力搅拌器、pH 计。
3.2 配制过程
- 称量 RPMI 1640 粉末： 按照培养基说明书上的配方，用电子天平精确称量所需量的 RPMI 1640 粉末。注意，不同批次的粉末培养基，配方可能略有不同，一定要仔细阅读说明书。
- 溶解粉末： 将称量好的 RPMI 1640 粉末倒入烧杯中，加入少量 Milli-Q 超纯水（约 80% 的最终体积）。用磁力搅拌器搅拌，使粉末完全溶解。注意，不要直接将粉末倒入大量水中，这样容易结块，难以溶解。配置过程中温度一般控制在室温即可，过高的温度可能会破坏培养基中的某些成分。
- 加入其他试剂： 按照说明书上的配方，依次加入 L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES 缓冲液等试剂。每加入一种试剂后，都要充分混匀。加入试剂的顺序一般没有严格要求，但建议先加入固体试剂，再加入液体试剂。L-谷氨酰胺是细胞生长的重要营养物质，丙酮酸钠可以为细胞提供能量，HEPES 缓冲液可以维持培养基的 pH 值稳定。这些试剂的用量一定要准确，否则会影响细胞的生长。
- 调节 pH 值： 用 pH 计测量培养基的 pH 值，并用 1N NaOH 或 1N HCl 调节 pH 值至 7.2-7.4。注意，pH 值的调节要缓慢进行，每次加入少量酸或碱，充分混匀后再测量 pH 值。pH 值过高或过低都会影响细胞的生长。
- 定容： 加入 Milli-Q 超纯水，将培养基定容至最终体积（例如 1L）。再次混匀。
- 过滤除菌： 用 0.22 μm 的无菌过滤器过滤培养基，去除细菌和其他微生物。过滤时，要使用无菌的过滤装置，并在超净工作台中进行操作，以避免污染。
- 分装： 将过滤后的培养基分装到无菌的培养瓶中，并做好标记，注明培养基的名称、批号、配制日期等信息。
4. 常见问题与解决方案
- 试剂溶解不完全： 可能是搅拌时间不够，或者水温过低。可以适当加热（不超过 37℃）并延长搅拌时间。如果仍然无法溶解，可能是试剂已经过期或者变质，需要更换新的试剂。
- 培养基出现浑浊： 可能是水质不纯，或者过滤不彻底。需要更换高纯度的水，并重新过滤。如果仍然浑浊，可能是培养基中某些成分发生了沉淀，需要更换新的培养基。
- pH 值不符合要求： 可能是试剂用量不准确，或者 pH 计校准不正确。需要检查试剂用量，并重新校准 pH 计。如果 pH 值仍然不符合要求，可以尝试用无菌的 1N NaOH 或 1N HCl 调节 pH 值。
- 试剂洒出： 立即用吸水纸擦拭干净，并用清水冲洗。如果洒出的试剂具有腐蚀性，需要戴上手套和护目镜，避免接触皮肤和眼睛。
- 仪器损坏： 立即停止使用，并向实验室负责人报告。不要自行拆卸或修理仪器，以免造成更大的损失。
5. 安全提示
- 个人防护： 配制培养基时，一定要佩戴手套、口罩、护目镜，避免接触有害试剂。
- 操作规范： 操作时要小心谨慎，避免洒出试剂、打翻容器等。
- 废弃物处理： 用过的试剂、耗材等要按照实验室的规定进行处理，不要随意丢弃。
6. 记录与存档
实验记录非常重要！一定要详细记录配制过程中的所有信息，包括：
- 日期和时间： 记录配制的具体时间和日期。
- 配制人： 记录配制人的姓名。
- 试剂批号： 记录所用试剂的批号。
- 仪器型号： 记录所用仪器的型号。
- 实验结果： 记录培养基的 pH 值、外观等。
这些记录要妥善保存，以备将来查阅。良好的实验记录习惯，是科研工作的基础。
年轻人，配制 RPMI 1640 培养基 看起来简单，但每个细节都不能马虎。记住，严谨细致是实验成功的关键！希望这份指南能对你有所帮助，祝你在科研道路上越走越远！你还可以参考 Gibco RPMI 1640 培养基 了解更多培养基信息。